Simultaneous determination of sulfamethoxazole, trimethoprim and bromhexine in veterinary formulation using high performance liquid chromatography (HPLC)

Objetivo: desarrollar y validar un método simple, sensible y rápido para la determinación simultánea de sulfametoxazol (SMT), trimetoprima (TMP) y bromhexina (BMX) en formulación veterinaria por cromatografía líquida de alta resolución de acuerdo con las directrices de validación y control. Guía para la calidad analítica de medicamentos en productos alimenticios y medicamentos veterinarios, RDC 166/2017 y guías internacionales Conferencia Internacional sobre Armonización y Asociación Internacional de Químicos Analíticos Oficiales. Materiales y métodos: la separación se realizó en una columna analítica ThermoScientific® C18 AcclaimTM120 (4,6 x 250 mm, 5 µm), con caudal de 0,7 mL min-1 y detección a 245 nm, 265 nm y 271 nm, para BMX, SMT y TMP, respectivamente. Todas las mediciones se realizaron en metanol:agua (84:16 v/v; pH 3,0). Las curvas analíticas fueron lineales (r > 0,9997) en el rango de concentración de 15.0 a 30.0 µg-mL-1 para SMT, 3.0 a 9.0 µg-mL-1 para TMP y 0,5 a 2,0 µg-mL-1 para BMX. Resultados: el método demostró ser preciso con coeficientes de variación por debajo del límite máximo de 2,0%, robusto, sin influencia significativa de las variaciones utilizadas en el análisis, exacto (recuperación >99%) y selectivo, en la evaluación de la interferencia de adyuvantes Conclusión: por lo tanto, el método desarrollado demostró ser adecuado para los análisis de control de calidad de rutina para la determinación simultánea de SMT, TMP y BMX en formulaciones farmacéuticas.

SUMMARY Aim: To develop and to validate a simple, sensitive and fast method for the simultaneous determination of sulfamethoxazole (SMT), trimethoprim (TMP) and bromhexine (BMX) in veterinary formulation by high performance liquid chromatography according to the guidelines of the Validation and Control Guide for analytical quality of medicines in food products and veterinary medicines, RDC 166/2017 and international guides International Conference on Harmonization and International Association of Official Analytical Chemists. Materials and methods: The separation was performed on a ThermoScientific® C18 AcclaimTM120 analytical column (4.6 X 250 mm, 5 µm), with a flow rate of 0.7 mL min-1 and detection at 245 nm, 265 nm and 271 nm, for BMX, SMT and TMP, respectively. All measurements were performed in methanol: water (84:16 v/v; pH 3.0). The analytical curves were linear (r > 0.9997) in the concentration range of 15.0 to 30.0 µg-mL-1 for SMT, 3.0 to 9.0 µg-mL-1 for TMP and 0.5 to 2.0 µg-mL-1 for BMX. Results: The method proved to be accurate, with coefficients of variation below the maximum limit of 2.0%, robust, without significant influence of the variations used in the analysis, exact (recovery >99%) and selective, in the assessment of interference from adjuvants. Conclusion: Therefore, the developed method proved to be suitable for routine quality control analyzes for the simultaneous determination of SMT, TMP and BMX in pharmaceutical formulations.

Objetivo: desenvolver e validar um método simples, sensível e rápido para a determinação simultânea de sulfametoxazol (SMT), trimetoprima (TMP) e bromexina (BMX) em formulação veterinária por cromatografia líquida de alta eficiência de acordo com as diretrizes do Validation and Control Guia de qualidade analítica de medicamentos em produtos alimentícios e medicamentos veterinários, RDC 166/2017 e guias internacionais Conferência Internacional de Harmonização e Associação Internacional de Químicos Analíticos Oficiais. Materiais e métodos: a separação foi realizada em coluna analítica ThermoScientific® C18 AcclaimTM120 (4,6 X 250 mm, 5 µm), com vazão de 0,7 mL min-1 e detecção em 245 nm, 265 nm e 271 nm, para BMX , SMT e TMP, respectivamente. Todas as medições foram realizadas em metanol:água (84:16 v/v; pH 3,0). As curvas analíticas foram lineares (r > 0,9997) na faixa de concentração de 15,0 a 30,0 µg-mL-1 para SMT, 3,0 a 9,0 µg-mL-1 para TMP e 0,5 a 2,0 µg-mL-1 para BMX. Resultados: o método mostrou-se preciso, com coeficientes de variação abaixo do limite máximo de 2,0%, robusto, sem influência significativa das variações utilizadas na análise, exato (recuperação >99%) e seletivo, na avaliação da interferência de adjuvantes. Conclusão: portanto, o método desenvolvido mostrou-se adequado para análises de controle de qualidade de rotina para a determinação simultânea de SMT, TMP e BMX em formulações farmacêuticas.

Validación de un método analítico para cuantificación de ferritina en líquido cefalorraquídeo / Validation of an analytical method for the quantification of ferritin in cerebrospinal fluid

Resumen La ferritina es una proteína de gran tamaño que se encuentra fisiológicamente en el líquido cefalorraquídeo (LCR) en concentraciones de 2-10 ng/mL. Su elevación puede utilizarse como biomarcador en distintas condiciones patológicas. El procedimiento de validación tradicional para la medición en LCR no puede ser utilizado debido a la ausencia de controles y calibradores comerciales para esta matriz. El objetivo de este trabajo fue llevar a cabo una validación analítica de ferritina en LCR. Se realizaron ensayos de estimación de precisión y veracidad mediante el protocolo EP15-A3, linealidad por el protocolo EP6-A (ambos de la guía de la CLSI), recuperación, estabilidad, contaminación por arrastre, interferencia por hemólisis y bilirrubina y límite de detección (LoD). La ferritina en LCR en el autoanalizador DxI 800 de Beckman Coulter tuvo una performance intra e interensayo <3,7%, el ensayo denota linealidad en el intervalo de 2,1-547 ng/mL; se estableció estabilidad por un período de 5 días y la recuperación resultó ser aceptable. No se evidenció efecto de contaminación por arrastre ni interferencia por hemólisis hasta un rango entre 300-500 mg/dL de hemoglobina, ni interferencia por bilirrubina hasta una concentración de 16,0 mg/dL de bilirrubina total. El LoD fue de 0,4 ng/mL. Por medio de los ensayos realizados se logró validar la ferritina en LCR a partir de la utilización de pools de muestras, lo que pudo garantizar la confiabilidad y exactitud del método analítico.

Abstract Ferritin is a large protein physiologically present in the cerebrospinal fluid (CSF) in concentrations of 2-10 ng/mL. Its elevation can be used as a biomarker in several pathological conditions. The traditional validation procedure for measurement in CSF cannot be used due to the absence of commercial controls and calibrators for this matrix. The objective of the present study was to perform CSF ferritin analytical validation. Assays such as precision and accuracy estimation through the EP15-A3 protocol, linearity according to the EP6-A protocol (both from the CLSI guidelines), recovery, stability, carry-over, hemolysis and bilirubin interference and limit of detection (LoD) were conducted. Serum samples with different concentrations of ferritin were added to aliquots of a normal CSF pool. CSF ferritin in the Beckman Coulter DxI 800 had a <3.7% intra and inter-assay performance, the assay shows linearity in the 2.1 -547 ng/mL interval, stability was established for a 5-day period and the recovery was acceptable. There was neither carry-over effect or hemolysis interference up to a range of 300-500 mg/dL of hemoglobin, nor interference by bilirubin up to 16.0 mg/dL of total bilirubin. The LoD was 0.4 ng/mL. By means of the performed assays, CSF ferritin was validated by using sample pools, thereby ensuring the reliability and accuracy of the analytical method.

Resumo A ferritina é uma grande proteína fisiologicamente encontrada no líquido cefalorraquidiano (LCR) em concentrações de 2 a 10 ng/mL. Sua elevação pode ser usada como biomarcador em diferentes condições patológicas. O procedimento de validação tradicional para medição no LCR não pode ser usado devido à ausência de controles e calibradores comerciais para esta matriz. O objetivo deste estudo foi realizar uma validação analítica da ferritina no LCR. Foram realizados estudos de precisão e veracidade utilizando o protocolo EP15-A3, linearidade pelo protocolo EP6-A (ambos das diretrizes do CLSI), recuperação, estabilidade, contaminação transportada, interferência de hemólise e bilirrubina e limite de detecção (LoD). A ferritina no LCR no DxI 800 da Beckman Coulter teve um desempenho intra e inter-ensaio <3,7%, o ensaio denota linearidade na faixa de 2,1-547 ng/mL, a estabilidade foi estabelecida em um período de 5 dias e a recuperação foi considerado aceitável. Nenhum efeito de transporte ou interferência por hemólise foi evidenciado até um intervalo entre 300-500 mg/dL de hemoglobina, nem interferência pela bilirrubina até uma concentração de 16,0 mg/dL de bilirrubina total. O LoD foi de 0,4 ng/mL. Através dos testes realizados, a ferritina no LCR foi validada, com base no uso de pool de amostras, o que poderia garantir a confiabilidade e a acurácia do método analítico.

Contenido de humedad, proteínas y minerales en diez variedades de quínoa chilena cultivadas en distintas zonas geográficas / Moisture, protein and mineral content of ten varieties of Chilean quinoa grown in different geographic zones

RESUMEN El consumo de quínoa (Chenopodium quínoa Willd) ha aumentado, renovando el interés en su composición y valor nutricional. El objetivo del estudio fue determinar los contenidos de humedad, cenizas, proteínas y algunos minerales (Fe, Zn y Cu) de 10 variedades de quínoa chilena cultivadas en cuatro zonas geográficas, utilizando metodologías analíticas validadas. Las muestras (n=10) de quínoa cultivada en Vallenar, Los Tilos, Hidango y Santa Rosa fueron analizadas en triplicado. Los métodos normalizados aplicados fueron: humedad; cenizas; proteínas; hierro, zinc y cobre, bajo los requisitos de ISO/IEC 17025:2017. Los datos se analizaron usando análisis de varianza para comparar variedades y zonas de cultivo. Las muestras contienen en promedio 16,6 g de proteínas/100 g (14,4-17,5), 8,97 mg de hierro/100 g (7,71-10,76), 3,38 mg de zinc/100 g (2,17-5,30), y 0,83 mg de cobre/100 g (0,60-1,10). Las variedades cultivadas en Vallenar, Los Tilos e Hidango mostraron mayor contenido proteico que las de Santa Rosa (p<0,05). Todas las variedades tienen un contenido destacado de los microminerales cobre, zinc y hierro. Los resultados aportan información relevante sobre el valor nutricional de la quínoa chilena, entregando datos para la actualización de las Tablas de Composición Química de alimentos.

ABSTRACT The intake of quinoa (Chenopodium quinoa Willd) has increased worldwide. Its revival has renewed interest in its composition and nutritional value. The aim of this study was to determine the contents of moisture, ash, protein, and some minerals (Fe, Zn and Cu) of ten varieties of Chilean quinoa grown in various geographical zones, using validated analytical methods under rule ISO/IEC 17025:2017. Grains grown in Vallenar, Los Tilos, Hidango, and Santa Rosa were analyzed in triplicates, using previously validated analytical methodologies and certified reference materials. The normalized methods used were: moisture; ash; protein; mineral, under the ISO/IEC 17025:2017 norm. Data were analyzed using ANOVA to compare varieties and growth zones. The analyzed quinoa grains contain a mean of 16.6 g proteins/100 g (range 14.4-17.5), 8.97 mg iron/100 g (range 7.71-10.76), 3.38 mg zinc/100 g, and 0.83 mg copper/100 g (range 0.60-1.10). The varieties grown in Vallenar, Los Tilos and Hidango showed higher protein content compared to Santa Rosa (p<0.05). All varieties exhibit considerable microminerals content, such as copper, zinc, and iron. These results provide relevant information about the nutritional value of Chilean quinoa and updated reliable data for Food Composition Tables.